Southern blot
Southern blot, Edwin Southern tarafından geliştirilmiş moleküler genetikte kullanılan hibridizasyon yöntemlerinden biridir.
Uygun probların kolaylıkla elde ediliyor olması insanda özel bir genin, bu geni klonlamaya gerek kalmaksızın analizine olanak sağlamıştır.
Yöntem
[değiştir | kaynağı değiştir]Bu yöntemde restriksiyon enzimiyle DNA fragmentlere ayrılır. Bu enzimler DNA'yı tanıdıkları özel dizilerden kırarlar, böylece çeşitli büyüklüklerde fragmentler oluşur.[1] Agaroz jel elektroforez yöntemiyle büyüklüklerine göre sıraya ayrılan bu fragmentler önce bazik pH ile denatüre edilip blot yöntemi ile nitroselüloz filtreye geçirilir.[2] Bu yöntemde kılcallık etkisi kullanılarak çözeltiyle beraber içindeki DNA fragmentlerinin aktarılması sağlanır.[3] Fosfor-32 ile (veya nükleotitlerde bulunan atomların diğer bir radyoaktif analoğuyla) işaretli denatüre edilmiş ve incelenecek bölgeye bağlanacak şekilde hazırlanmış olan prob filtre üzerinde tutulan fragmentlerden kendisine uyanla hibridize olur, yani hidrojen bağı oluşturur. Sonrasında, filtre üzerine bir röntgen filmi konularak otoradyografi işlemi gerçekleştirilir. Bu işlemde radyoaktif probdan gelen radyasyon bağlandığı yerde iz bırakır ve bandı gösterir.[4] Günümüzde radyasyon yerine floresan problar da kullanılmaktadır.[5]
Ayrıca bakınız
[değiştir | kaynağı değiştir]Kaynakça
[değiştir | kaynağı değiştir]- ^ Çakır, Şevval (13 Kasım 2018). "Restriksiyon Endonükleazlar ve Fonksiyonları". Lab Akademi. 14 Nisan 2025 tarihinde kaynağından arşivlendi. Erişim tarihi: 14 Nisan 2025.
- ^ Sapkota, Anupama (3 Haziran 2021). "Southern Blot- Definition, Principle, Steps, Results, Applications". microbenotes.com (İngilizce). 17 Mart 2025 tarihinde kaynağından arşivlendi. Erişim tarihi: 14 Nisan 2025.
- ^ Southern, Ed (Ağustos 2006). "Southern blotting". Nature Protocols (İngilizce). 1 (2): 518-525. doi:10.1038/nprot.2006.73. ISSN 1754-2189. 14 Nisan 2025 tarihinde kaynağından arşivlendi14 Nisan 2025.
- ^ Mattaini, Katherine (5 Şubat 2022). "Southern blot" (İngilizce). 14 Nisan 2025 tarihinde kaynağından arşivlendi14 Nisan 2025.
- ^ Cheng, Ying; Wang, Na; Ren, Zhenxing; Xu, Chenggang (Haziran 2022). "Development of fluorescence-based nucleic acid blot hybridization method using Cy5.5 labeled DNA probes". Journal of Microbiological Methods (İngilizce). 197: 106479. doi:10.1016/j.mimet.2022.106479. ISSN 0167-7012. 14 Nisan 2025 tarihinde kaynağından arşivlendi14 Nisan 2025.
